Décontamination des cultures avec Antibiotiques et Antimycotiques

Lorsqu'une culture irremplaçable est contaminée, il peut être important d'essayer de la décontaminer ou du moins de stopper la contamination.

Il faut avant tout déterminer si la contamination est liée à la présence de bactéries, de champignons, de levures ou de mycoplasmes. Isoler la culture contaminée. Nettoyer incubateurs et hottes à flux laminaire avec un désinfectant (par exemple le Formol en cas de contamination par les mycroplasmes) et vérifier les filtres HEPA.

Les antibiotiques et les antimycotiques utilisés à forte concentration peuvent être toxiques pour certaines lignées cellulaires; il est par conséquent recommandé de déterminer la concentration à laquelle l'antibiotique ou l'antimycotique devient toxique. Ceci est particulièrement important lors de l'utilisation de la Fungizone ou de la tylosine. Vous trouverez ci-après un protocole pour déterminer la dose toxique et pour décontaminer les cul tures.

Dissocier, compter et diluer les cellules dans un milieu sans antibiotiques. Diluer les cellules à la concentration usuelle.
Répartir la suspension cellulaire dans une plaque multiquits ou dans plusieurs petits flacons. Ajouter l'antibiotique dans chaque puits à des concentrations différentes pour établir une gamme. Par exemple, pour la Fungizone, utiliser les concentrations suivantes: 0,25. 0,50.1,0. 2,0. 4,0. et 8,0 ug/ml.
Observer les cellules chaque jour, rechercher les signes de toxicité tels que détachement, vacuolisation, changement de forme ou diminution de la croissance.
Lorsque la concentration toxique de l'antibiotique a été déterminée, repiquer les cellules deux à trois fois dans un milieu contenant l'antibiotique à une concentration une à deux fois inférieure à la concentration toxique.
Repiquer les cellules dans un milieu sans antibiotique.
Répéter l'étape 4.
Repiquer les cellules 4 à 6 fois dans un milieu sans antibiotique pour vérifier que la contamination a bien été éliminée.