La législation Européenne de plus en plus contraignante oblige ces laboratoires à mettre à disposition un dossier qualitatif et quantitatif des ingrédients composant les produits mis sur le marché. Ces dispositions ont pour effet d'obliger les laboratoires à mener un contrôle de qualité de haut niveau leur permettant de répondre aux exigences techniques imposées.
D'autre part la recherche en cosmétologie fait largement appel aux composés issus de substances naturelles. Par définition, ces composés sont difficiles à séparer par les méthodes traditionnelles comme l'HPLC.
Dans ce contexte, l'OPLC (Optimum Performance Laminar Chromatography) se révèle être une technique bien adaptée aux analyses réalisées par les laboratoires de cosmétologie, tant du point de vue de la recherche que du QC de produits finis.
Intégrant les avantages de l'HPLC et de la CCM, l'OPLC est une technique de chromatographie liquide qui permet des séparations sans préparation d'échantillons préalable dans la plupart des cas, avec une consommation très faible en solvants (de l'ordre de quelques centaines de microlitres par échantillon). Elle permet également l'analyse simultanée de nombreux échantillons (de l'ordre de 70 si on utilise tout le potentiel du support chromatographique). Son principe peut être schématiquement décrit comme étant de l'HPLC sur colonne plate (HTSorbTM: 5x20, 10x20 ou 20x20cm, épaisseur de 250µm).
Deux exemples sont décrits afin de montrer le potentiel de la technologie
Exemple 1 : la séparation des esters de parabènes et éthoxy-éthanol. Les parabènes et l'éthoxy-éthanol sont des molécules communément utilisées comme conservateurs (anti-bactériens puissants) dans beaucoup de préparations de l'industrie cosmétique comme les shampoings et crèmes de soin.
Notre laboratoire a développé une méthode sur OPLC à partir d'un mélange de méthyl, éthyl, propyl, et butyl-parabènes (fig.1). La séparation dure 8 minutes au total, quelque soit la quantité d'échantillons déposés (jusqu'à 50 dans notre exemple). Puis une courbe étalon a été réalisée pour chacun des esters, sur la même HTSorb de 200x200x0,2mm, silice 5µm (fig.2: courbe étalon du méthyl parabène). La détection est faite à 254nm au moyen d'un spectro-densitomètre.
Afin de vérifier la reproductibilité de la méthode, 10 échantillons contenant chacun les 4 esters ont été déposés sur la même HTSorb. Il a ainsi été possible d'établir, à partir du même support, les CV de chacun des esters. Des coefficients de variation inférieurs à 5% permettent l'établissement d'un contrôle de qualité efficace.
Le temps de séparation est de 8 minutes au total pour la séparation simultanée de tous les échantillons déposés, comparable au temps de séparation par échantillon unique en méthode HPLC. L'intérêt de l'utilisateur est par conséquent d'analyser le maximum d'échantillons en même temps, tant du point de vue rapidité que de celui de la consommation en éluant (dans notre exemple 1,8mL sont utilisés au total, quelque soit le nombre d'échantillons, correspondant ainsi à une consommation de quelques centaines de µl par échantillon).
De plus, la méthode OPLC ne requiert pas d'équilibrage préalable de colonne.
Afin de vérifier la capacité de la technique à séparer des échantillons sans préparation préalable, 1µL de chacun de 6 échantillons bruts de shampoings du commerce ont été déposés sans autre préparation qu'un simple dilution dans de l'eau distillée. Des standards sont déposés en parallèle. Nous avons constaté que tous les esters de parabènes ainsi que le phenoxy-éthanol pouvaient être facilement identifiés et quantifiés directement, permettant ainsi un gain de temps important pour le laboratoire.
Exemple 2: séparation de benzophénone-2
Les benzophénones sont des substances prévenant la dégradation les produits par UV. On les retrouve dans de nombreux produits du commerce.
Notre laboratoire a effectué la séparation de la benzophénone-2 contenue dans une crème de soin. L'objectif de l'analyse était d'effectuer une courbe étalon à partir de dilutions successives d'une solution mère standard de concentration 0,75µg/mL, de quantifier 3 échantillons différents sur le même support HTSorb, de faire une étude de reproductibilité afin de vérifier la fiabilité de la méthode.
Résultats obtenus: la concentration des 3 échantillons testés était respectivement de 0,088%, 0,098%, et 0,155% dans les produits testés, donc conformes à la législation. Le coefficient de corrélation de la courbe étalon était de 0,9956. La reproductibilité obtenue après application de 10 fois 0,8µg de l'échantillon 2 a procuré un excellent CV de 2,45% (détection par spectro-densitométrie). La consommation totale en éluant a été de 10mL pour temps total de séparation (courbe étalon et inconnus) de 20min.
Conclusion: d'autres applications particulièrement intéressantes sur les colorants, les pigments naturels, les émulsifiants, ... ont été développées. La mise au point de ces applications, de même que les capacités de l'instrument de pouvoir être utilisé en semi-préparative, permettent ainsi à la technique OPLC de prendre sa place en tant que méthode analytique de choix dans le laboratoire de cosmétologie moderne.
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Philippe KEROUREDAN
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