Mai 2001 - n°58
MICROBIOLOGIE DE L'AIR : Contrôle des isolateurs
Olivier GUENEC - Sartorius S.A.
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E-mail : olivier.guenec@sartorius.com
Grâce à la méthode par filtration sur membrane en gélatine, il est possible de contrôler la qualité microbiologique de l'air des isolateurs.
Les isolateurs sont protégés de façon fiable des contaminations, à condition que l'alimentation en air et le transfert des objets à l'intérieur et à l'extérieur soient suffisamment contrôlés. Toutefois, des microorganismes véhiculés par inadvertance dans les enceintes stériles peuvent s'y propager de façon incontrôlée et compromettre la qualité du produit fabriqué et des tests réalisés.
De plus, les nouvelles recommandations (Bonnes Pratiques de Fabrication - EU Guidelines) devenant de plus en plus strictes, il existe un besoin croissant pour des contrôles intensifs de la qualité microbiologique de l'air dans les isolateurs.
Qu'est-ce qu'un isolateur?
Les isolateurs sont des systèmes qui séparent totalement différentes classes de salle propre (pas d'échange direct de l'air avec l'environnement). Les entrées et les sorties d'air sont équipées de filtres HEPA ou ULPA. Toute entrée ou sortie de matériel doit être faite dans des conditions qui ne compromettent pas l'isolement par rapport à l'environnement extérieur. Par ailleurs, l'intérieur de l'isolateur doit être entièrement stérilisable, ainsi que les produits qui s'y trouvent.
Les risques de contamination
L'expérience montre que les risques principaux de contamination microbiologique des isolateurs se situent au niveau des aérateurs, des systèmes de filtration, des gants et des hémi scaphandres.
Un autre point critique est le transfert de matériels et de produits. Des systèmes de transfert rapide, qui permettent de transférer du matériel en maintenant une parfaite isolation vis-à-vis de l'extérieur, ont été développés afin de minimiser les risques de contamination.
Cependant, le risque de contamination n'étant pas totalement supprimé, les contrôles microbiologiques demeurent nécessaires au bon fonctionnement des isolateurs.
Méthodes de contrôle
Les salles propres et les isolateurs peuvent être contrôlés avec des méthodes qualitatives (sédimentation sur milieu de culture solide en boîte de Pétri) ou avec des méthodes quantitatives (impaction, mise en suspension et filtration).
Les méthodes quantitatives doivent satisfaire à certains critères :
- Le débit d'air doit être constant.
- Les microorganismes doivent être maintenus dans des conditions humides.
- L'efficacité de rétention des microorganismes doit être élevée, certifiée et documentée.
La méthode par filtration sur membrane en gélatine, en combinaison avec un appareil spécifique au prélèvement d’air dans les isolateurs, remplit ces critères et apporte également des bénéfices supplémentaires :
- rétention absolue (99,9995% pour des spores de B. subtilis niger, 99,94% pour des coliphages T3).
- convient pour des niveaux de contamination très faibles (possibilité de prélever plus de 1 m3 en un temps raisonnable).
- prélèvement isocinétique dans les environnements équipés de flux laminaires
- calibrage validable
- convient à une utilisation dans les salles propres de classe A et B, et pour les isolateurs : positionnement possible de l'appareil à l'extérieur.
Principe
Comme le montre la photographie ci-jointe, le prélèvement d'air dans l'isolateur s'effectue en connectant à l’extérieur l'appareil dédié, par le biais de raccords adaptés. La stérilité de l'enceinte n'est pas compromise grâce à l'utilisation d'une capsule de filtration contenant une membrane en PTFE de seuil de rétention absolu 0,2 µm.
Les différents composants du système qui se situent à l'intérieur sont tous stérilisés à l'autoclave ou livrés stériles (consommable). La stérilité de l'enceinte est ainsi assurée et les opérations peuvent être validées avec les garanties nécessaires (certificats).
Avantages
Pour résumer, entre autres avantages importants de cette méthode de contrôle microbiologique de l’air des isolateurs, par filtration sur membrane en gélatine, quatre points sont à retenir :
1/ L’appareil de prélèvement reste à l’extérieur ; d’où, l’élimination des risques de corrosion et des turbulences ainsi que la possibilité de déconnecter l’appareil pour contrôler la salle où se situe l’isolateur.
2/ Tout ce qui est introduit est stérile ; d’où l’absence de risque de contamination et l’opportunité de valider les opérations.
3/ Le personnel et le produit sont parfaitement protégés grâce au filtre PTFE 0,2 µm.
4/ Les procédures de qualification sont réalisables sans contrainte : QI (Qualification de l’Installation) et QO (Qualification Opérationnelle).
HEPA = High Efficiency Particulate Air (filter)
ULPA = Ultra Low Penetration Air (filter)