Le site de Peyruis d’Eurofins BioPharma Product Testing (BPT) France, près de Marseille, a la particularité d’avoir développé une expertise en titrage microbiologique des antibiotiques, peu répandue dans d’autres laboratoires, ce qui en fait un partenaire privilégié pour les acteurs pharmaceutiques et fabricants de dispositifs médicaux.
Un réseau français important
CRO (Contract Research Organisation), le réseau de laboratoires Eurofins BioPharma Product Testing France fournit aux industries pharmaceutiques, biotechnologiques et du dispositif médical des services analytiques, conformément aux réglementations (EMA, FDA, ISO etc.) et selon les référentiels BPF, BPL et Cofrac en vigueur, pour le développement et la commercialisation de (bio)médicaments humains, vétérinaires et dispositifs médicaux.
Depuis plus de 20 ans, ses équipes accompagnent et conseillent différents types de clients. Grâce à son expertise technique, scientifique et réglementaire, Eurofins BioPharma Product Testing France s’adapte spécifiquement aux projets de ses clients, en leur offrant un accompagnement personnalisé et un service client de qualité pour des solutions adaptées à leurs attentes.
En France, le réseau d’Eurofins BioPharma Product Testing est composé de 6 laboratoires, organisés autour de 3 campus principaux :
- Les Ulis (Paris) pour le stockage en enceintes de stabilité, le contrôle qualité gros volumes et les analyses environnementales.
- Fontenilles (Toulouse) pour le développement analytique et le contrôle qualité.
- Lentilly (Lyon) pour les produits biologiques et les analyses environnementales.
Et de 3 laboratoires spécialisés :
- Sainte-Croix-en-Plaine (Colmar) pour la microbiologie et les analyses environnementales.
- Peyruis (Marseille) pour la microbiologie et les dispositifs médicaux.
- Saint Augustin (Tulle) pour le stockage en enceinte de stabilité et le contrôle qualité de produits finis.
Concentrons-nous sur l’activité de titrage microbiologique des antibiotiques, située sur le site de Peyruis d’Eurofins BPT France.
Une activité qui prend de l’ampleur
L’activité de titrage microbiologique des antibiotiques existe sur le site de Peyruis depuis les années 2000, à l’époque où ce site appartenait à Avepharm, puis AmatsiGroup, avant de rentrer dans le giron d’Eurofins. Représentant initialement 20 à 25% de l’activité du site de Peyruis, cette activité a pris de l’ampleur au sein d’Eurofins BPT France.
Les antibiotiques titrés existent sous forme de matières premières, de médicaments à prise orale, de pommades, de collyres, de solutions injectables et sous forme de substituts osseux. Les contrôles microbiologiques des antibiotiques sont réalisés tout au long de la chaîne de production, de la matière première jusqu’au produit fini, dans le but de vérifier l’efficacité de l’antibiotique tout au long du cycle de vie du produit.
Pour rappel, le titrage microbiologique est la méthode la plus ancienne pour déterminer le titre d’un antibiotique. L’activité d’un antibiotique est estimée par comparaison de l’inhibition de la croissance de microorganismes sensibles provoquée respectivement par des concentrations connues de l’antibiotique à examiner (titre théorique de l’échantillon) et d’une substance de référence (étalon SCR ou USP avec titre connu). Le titrage peut se faire par diffusion, c’est-à-dire avec un microorganisme cultivé en milieu solide, ou par turbidimétrie, c’est à dire avec un microorganisme cultivé en milieu liquide.
Le choix de la méthode de titrage est dicté par les pharmacopées.
La méthode par turbidimétrie est en cours de mise en place chez Eurofins BPT France et sera proposée prochainement.
Les processus selon les pharmacopées
Le laboratoire de Peyruis pratique essentiellement le titrage microbiologique par ensemencement en gélose. Plusieurs techniques de diffusion (PE 2.7.2) sont utilisées :
En puits : des puits (ou cupules) sont creusés à l’intérieur d’une gélose qui a été ensemencée avec un germe sensible à l’antibiotique.
En disques de papier : Dépôt sur une gélose de disques en papier, imprégnés avec différentes solutions d’antibiotiques
En cylindres : une première couche de gélose non ensemencée (neutre), servant de support, est recouverte d’une seconde couche ensemencée avec le germe sensible à l’antibiotique, sur laquelle seront posés des cylindres en acier inoxydable.
Les solutions de la préparation de références et celles de l’antibiotique à titrer, de concentrations présumées proches, seront déposées soit dans les cupules soit dans les cylindres soit à la surface de la gélose sur des disques imprégnés. Après incubation, les zones d’inhibitions (zones circulaires sans croissance bactérienne) seront lues.
À la suite de l’incubation et de la lecture des zones d’inhibition par caméra optique, l’utilisation du software Combistats d’analyses statistique de la Pharmacopée Européenne est utilisée pour déterminer la validité du titrage et obtenir un titre de l’échantillon devant répondre à une spécification propre au produit testé.
Cependant, depuis peu, une autre activité liée au référentiel USP (Pharmacopée américaine – USP « 81 ») qui utilise la technique des cylindres posés sur la gélose, a été mise en place sur le site de Peyruis.
Le laboratoire effectue le titrage d’antibiotique sur différentes formes galéniques. En fonction de la molécule et du type de matrice, les méthodes mises au point seront plus ou moins faciles/complexes. Par exemple, si la matrice est grasse et retient très bien la molécule, il faudra trouver le moyen de « casser » cette matrice afin d’extraire la molécule. Le laboratoire peut aussi travailler avec des molécules qui ne font pas encore partie des Pharmacopées, notamment des molécules de 3e et 4e génération, l’étalon (échantillon de la matière première) étant dans ce cas fourni par le client.
La clientèle concernée par cette activité est en majorité issue de l’industrie pharmaceutique humaine et vétérinaire. En parallèle des collaborations établies de longue date, de nouveaux clients ayant un projet de développement d’un produit font également appel à l’expertise d’Eurofins BPT.
Dans tous les cas, que ce soient pour de nouvelles formulations avec d’anciennes ou nouvelles molécules, dans le cadre de validation ou d’étude de stabilité, étude de la formulation et de sa stabilité dans certaines conditions climatiques, et ainsi déterminer une durée de vie du médicament selon le marché dans lequel il sera vendu (Europe, Nord-Américain, Asie ou Afrique), ces études sont menées selon les exigences réglementaires pour répondre au mieux aux demandes clients. Il arrive aussi que des études soient menées quant à l’utilisation du médicament, avec phase de secouage avant utilisation (phénomène d’adsorption entre l’antibiotique et le contenant ou sédimentation de l’antibiotique dans la formulation, et donc nécessité d’homogénéiser le médicament en le secouant). Eurofins BPT France accompagne ses clients dans leurs projets et répond à leurs interrogations et problématiques.
Comment se déroule une collaboration ?
Un cahier des charges est établi entre Eurofins BPT France et le client, spécifiant les attentes de ce dernier concernant le titrage microbiologique d’antibiotique et la validation de méthode.
Etape indispensable avant les analyses de routines, la réglementation oblige la validation analytique des méthodes, afin d’assurer la fiabilité des résultats dans les conditions opératoires du laboratoire de contrôle.
Cette validation de méthode répond aux critères suivants :
- Gamme de validation : Intervalle de concentration dans lequel la méthode est dite validée.
- Spécificité/Sélectivité : Méthode de titrage de l'antibiotique spécifique à l’antibiotique seul présent dans le produit fini, sans actions d’un ou plusieurs excipients.
- Linéarité : La linéarité du titrage permet de définir l’intervalle dans lequel la réponse activité/concentration est linéaire et proportionnelle et donc de la fiabilité du résultat dans cet intervalle de concentrations.
- Exactitude : Permet de définir l’exactitude du résultat obtenu dans cet intervalle de concentration.
- Fidélité (2 composantes) :
Répétabilité : La répétabilité est le critère justifiant de la précision de la méthode d’analyse.
Fidélité intermédiaire : La partie fidélité intermédiaire permet de justifier de l’indépendance de la méthode avec des évènements extérieurs à la méthode elle-même au sein d’un même laboratoire.
Après ces différentes étapes, l’équipe du site de Peyruis pourra confirmer à son client si ses méthodes opératoires répondent au cahier des charges de validation. Le titrage en routine de l’échantillon pourra ensuite s’effectuer selon cette méthode.
Certains clients effectuent la validation auprès d’un autre laboratoire ou prestataire et travaillent ensuite pour la routine avec Eurofins BPT. Dans ce cas, une étape de transfert ou de revalidation de la méthode est nécessaire, afin de vérifier si les conditions opératoires du site de Peyruis peuvent intégrer la méthode définie par le laboratoire tiers.
Par ailleurs, il y a aussi des produits pour lesquels le client ne souhaite pas avoir de validation, puisque ce sont des matières premières ou molécules répondant à des monographies détaillées (texte définissant les caractéristiques physico-chimiques d’une molécule). Dans ce cas-là, il est précisé au client que le rendu est brut et sans conformité, la décision de conformité appartenant au client.
En général, les clients demandent une validation de méthode pour un nouveau produit, afin d’enregistrer cette méthode dans le dossier d’autorisation de mise sur le marché (AMM), et de pouvoir également enregistrer Eurofins BPT France comme laboratoire prestataire.
Les autres activités du site
Les bâtiments du site de Peyruis d’Eurofins BPT France s’étendent sur 770 m2 de bâtiments, dont 550 m2 de laboratoires GMP (certifications ANSM, ANSES, FDA et COFRAC).
Le laboratoire de Peyruis a aussi d’autres activités :
- l’étude de la contamination microbienne avec le dénombrement des germes totaux et le dénombrement des levures et moisissures, recherche de germes spécifiés ainsi que Burkholderia Cepacia pour certains produits destinés au marché US,
- contrôles environnementaux,
- les tests de stérilité,
- les tests de challenge tests (conservation antimicrobienne),
- le dosage des endotoxines,
- les analyses de dispositifs médicaux,
- les essais particuliers comme les CMI (concentration Minimale Inhibitrice) et/ou Bactéricide (CMB),
- les essais microbiologiques hors cadre réglementaires accompagnant les problématiques clients,
- le Microbial Integrity Test (MIT),
- les études à façon en fonction d’un design client.
Dans le laboratoire de 35 m2 dédié au titrage microbiologique des antibiotiques, les équipes disposent de différentes équipements, notamment : hotte chimique, spectrophotomètres, balance de précision pour les pesées des molécules de référence et des molécules échantillons, pipettes pour les transferts et dilutions, étuves pour incuber les plaques de titrages afin d’obtenir des zones d’inhibition, Bain marie pour les milieux de culture en surfusion, four à vide pour sécher les étalons USP sous vide avant utilisation et pour les tests de dessiccation et caméra.
Un autre local adjacent de 20 m2 aménagé durant le premier trimestre 2025, notamment avec une hotte chimique, sera dédié aux extractions d’antibiotiques par l’utilisation de solvants organiques.
Après une formation en biochimie et en génétique microbienne, Alain Pontonnier a intégré Avepharm et le laboratoire de Peyruis en 2003, où il a évolué sur tous les postes avant d’avoir la charge de l’activité de titrage des antibiotiques. Il travaille aujourd’hui avec 3 techniciennes microbiologistes.
Fort de son expertise, le site Peyruis d’Eurofins BPT France compte renforcer et faire connaître davantage son activité de titrage microbiologique des antibiotiques. Pour cela, l’équipe dédiée mise sur l’augmentation des demandes, notamment en projets de R&D, en développement de nouveaux produits nécessitant parfois des études d’interactions entre molécules et contenants. Son objectif dans l’avenir ? Devenir un pôle d’excellence dans cette spécialité !
Contact :
Eurofins BioPharma Product Testing France
Tél. : 01 69 10 60 32
Mail : infofr@bpt.eurofinseu.com
www.eurofins.fr/biopharma-product-testing
LinkedIn : www.linkedin.com/company/eurofins-bpt-france
M. HASLÉ
© La Gazette du Laboratoire
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