Le plasmide d’assistance et d’emballage pDP2 (pDG) s’est avéré exceptionnellement utile dans le cadre du système AAV à 2 plasmides pour réduire la complexité, les temps de développement ainsi que les coûts pour la transfection transitoire lors de la fabrication de vecteurs viraux adéno-associés.
Ce plasmide contient les gènes rep et cap pour le sérotype AAV 2 ainsi que les gènes d’assistance adénoviraux E2A, E4 et VA RNA. Lorsqu’il est transfecté avec un plasmide de transfert contenant le gène d’intérêt encadré par des séquences ITR, dans une lignée cellulaire productrice HEK-293 exprimant les gènes E1, ce système à 2 plasmides est très efficace pour produire des particules de vecteur viral adéno-associé recombinant. Développés par Grimm et al., au Centre de Recherche sur le Cancer en Allemagne à Heidelberg, ces plasmides sont produits et commercialisés par PlasmidFactory GmbH grâce à une licence exclusive mondiale permettant à de nombreux clients de bénéficier de cette technologie au fil des ans.
À mesure que le domaine de la thérapie génique mûrit et entre en phase clinique, les agences réglementaires ont stipulé certaines conditions sur les matières premières utilisées pour générer les vecteurs géniques. L’une d’entre elles est le marqueur de sélection utilisé sur le plasmide. Généralement, il s’agissait du gène de résistance à l’ampicilline qui code pour une enzyme qui rompt l’anneau bêta-lactame de l’ampicilline. Cependant, cela pose un sérieux problème de propagation de la résistance aux antibiotiques, mettant particulièrement en danger d’autres antibiotiques importants de la famille des bêta-lactames tels que les dérivés de la pénicilline. Récemment, de nombreux instituts ont opté pour une sélection basée sur la résistance à la kanamycine, dans tous les cas, au plus tard lors de l’entrée en essais cliniques.
À cet égard, PlasmidFactory annonce le plasmide pDP2 bien établi, maintenant avec la résistance à la kanamycine à la place de la résistance à l’ampicilline. Il sera commercialisé sous le nom de pDP2K avec le numéro de plasmide PF2432. Ce plasmide a été produit avec succès et est désormais également disponible prêt à l’emploi en Qualité Haute, spécialement conçu pour être utilisé comme matière première pour les productions GMP d’AAV vecteurs.
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